Соскоб со слизистой оболочки цервикального канала (эктоцервикс и эндоцервикс), взятие материала для ПЦР. ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора

Перейти к списку биоматериалов

Расходные материалы и реагенты

Щётка эндоцервикальная

Например, «Rovers Cervex-Brush Combi» («Rovers Medical Devices B.V.», Нидерланды) или аналогичная

Зонд гинекологический комбинированный

Например, ЗГК «ЦМ» (ООО «Центрмед», Россия) или аналогичный

Пробирки с винтовой горловинной крышкой объёмом 5,0 мл

Например, «Axygen, Inc.», США или аналогичные с транспортной средой:

Транспортная среда (например, «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия, РУ № ФСР 2009/05514) или аналогичная

Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объёмом 1,5; 2,0 мл

Например, микроцентрифужные пробирки «Axygen, Inc.», США или аналогичные с транспортной средой:

Транспортная среда (например, «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия, РУ № ФСР 2009/05514) или аналогичная

Одноразовые стерильные виалы с транспортной средой

Например, «BD SurePath™ Liquid-Based Pap Test», США или аналогичные с транспортной средой:

Транспортно-фиксирующая спиртосодержащая среда для жидкостной цитологии (например, «PreservCyt Hologic Inc.», США, РУ № ФСЗ 2012/11752, или аналогичная)

Набор для взятия цервикальных проб «DNAPAP Cervical Sampler»

Из набора реагентов «Digene HPV test» («QIAGEN GmbH», Германия, РУ № ФСЗ 2010/06595) или аналогичный

Взятие

Доступ к цервикальному каналу необходимо обеспечить с помощью одноразового или многоразового стерильного гинекологического зеркала. Перед получением материала слизь и отделяемое влагалища с поверхности шейки матки удалить стерильным марлевым тампоном (допустимо минимальное присутствие примесей в виде цервикальной слизи и крови). Взятие материала провести с помощью эндоцервикальной щётки (цитощётки) или зонда гинекологического комбинированного (допускается использование при обследовании беременных, молодых нерожавших женщин).

Способы взятия соскобов эпителиальных клеток

Первый способ: используются цитощётка (одна или две) и пробирка с 0,5 мл «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)». Соскоб эпителия цервикального канала (эндоцервикс), взятый одной цитощёткой, и/или соскоб эпителия с поверхности шейки матки (эктоцервикс), взятый второй цитощёткой, поместить в пробирку с транспортной средой.

Второй способ: используется набор для взятия цервикальных проб, содержащий цитощётку и пробирку с транспортной средой «Digene». Соскоб эпителия цервикального канала (эндоцервикс) поместить в пробирку с транспортной средой.

Третий способ: используются комбинированный гинекологический зонд для одновременного взятия эпителия из эндо- и эктоцервикса и пробирка объёмом 5,0 мл с 2,0 мл «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)». Соскоб эпителия цервикального канала (эндоцервикс и эктоцервикс) поместить в пробирку с транспортной средой.

Четвертый способ: используются комбинированный гинекологический зонд для одновременного взятия эпителия из эндо- и эктоцервикса и виала с транспортно-фиксирующей средой для жидкостной цитологии. Соскоб эпителия цервикального канала (эндоцервикс и эктоцервикс) поместить в виалу с транспортной средой.

Рабочую часть цитощётки/зонда, содержащую исследуемый материал, обломить и оставить в пробирке или виале с транспортной средой. Пробирку, виалу плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки.

В случае невозможности обламывания погрузить рабочую часть цитощётки/зонда в транспортную среду и, прижав её к внутренней стороне пробирки, виалы, вращать 5–10 с, после чего цитощётку/зонд удалить. Пробирку, виалу плотно закрыть крышкой. Недопустимо использование ножниц для обрезания рабочей части цитощётки/зонда!

Хранение

Условия хранения и транспортировки материала

1) При использовании «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)»:

при температуре 18–25 °С — в течение 28 сут;
при температуре 2–8 °С — в течение 3 мес;
при температуре –20 °С и ниже — длительно.

Допускается однократное замораживание–оттаивание материала;

2) при использовании транспортной среды «Digene»:

в соответствии с инструкцией к используемому комплекту реагентов;

3) при использовании транспортно-фиксирующей спиртосодержащей среды для жидкостной цитологии:

при температуре 18–25 °С — в течение 28 сут;
при температуре 2–8 °С — в течение 6 мес.

Предварительная обработка

Образцы, взятые в транспортные среды «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)» или «Digene», не требуют предварительной обработки.

Образцы, взятые в транспортно-фиксирующую спиртосодержащую среду для жидкостной цитологии, требуют предварительной обработки (концентрирование эпителиальных клеток). Важно, чтобы первой отбиралась аликвота клеток для ПЦР-исследования, второй — для проведения жидкостной цитологии.

Для образцов, взятых в транспортно-фиксирующую спиртосодержащую среду для жидкостной цитологии, требуется концентрирование эпителиальных клеток.

Способ первый. Виалу с образцом для жидкостной цитологии интенсивно встряхнуть для дезинтеграции клеток и оставить при температуре 18–25 °С на 30 мин для оседания клеток. Затем 1 мл осадка перенести в пробирку объёмом 1,5 мл, используя наконечник с фильтром. Центрифугировать 5 мин при 12 000 g (например, 13 400 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия)). Не захватывая осадок, удалить супернатант, используя наконечник без фильтра и отсасыватель медицинский, оставить 100 мкл надосадочной жидкости и осадок. Полученную пробу после тщательного перемешивания на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель MSC-3000 (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичном) и осаждения капель со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием в течение 3–5 с использовать для экстракции НК.

Способ второй. Виалу с образцом для жидкостной цитологии интенсивно встряхнуть для дезинтеграции клеток. 1,0–2,0 мл клеточной взвеси перенести в пробирку объёмом 2,0 мл, используя наконечник с фильтром. Центрифугировать 5 мин при 12 000 g (например, 13 400 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия)). Не захватывая осадок, удалить супернатант, используя наконечник без фильтра и отсасыватель медицинский, оставить 100 мкл надосадочной жидкости и осадок. Полученную пробу после тщательного перемешивания на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель «MSC-3000» (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичном) и осаждения капель со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием в течение 3–5 с использовать для экстракции НК.

Выявляемые патогены

Биологический материал используется для выявления нуклеиновых кислот следующих микроорганизмов

Соскоб со слизистой оболочки цервикального канала (эктоцервикс и эндоцервикс)

Вирусы
Human alphaherpesvirus 1	●
Human alphaherpesvirus 2	●
Human betaherpesvirus 5	●
Human papillomavirus	●

Бактерии
Chlamydia trachomatis	●
Mycoplasma genitalium	●
Mycoplasma hominis	●
Neisseria gonorrhoeae	●
Treponema pallidum	●
Ureaplasma parvum	●
Ureaplasma urealyticum	●