Мокрота, взятие материала для ПЦР. ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора

Расходные материалы и реагенты

Контейнер пластиковый для взятия, хранения и транспортировки биологических образцов для анализа объёмом 30 мл (стерильный, в индивидуальной упаковке)

Например, ООО «Комбитек Пластик», Россия или аналогичный

Взятие

Мокроту в объёме не менее 1,0 мл (оптимально 3,0–5,0 мл) собрать в контейнер, плотно закрыть крышкой. Качественным материалом можно считать мокроту, имеющую слизистый или слизисто-гнойный характер. Если пациент не выделяет мокроту или выделяет её только эпизодически и в скудном количестве, то накануне вечером и рано утром в день сбора биологического материала следует дать ему отхаркивающее средство или применить раздражающие ингаляции. При получении индуцированной мокроты в сопроводительном документе необходимо отметить, что материал получен после аэрозольных ингаляций.

Хранение

Условия хранения и транспортировки материала и предварительно обработанных проб

При температуре 18–25 °С — в течение 6 ч;
при температуре 2–8 °С — от 1 до 3 сут (в зависимости от используемого набора реагентов);
при температуре от –24 до –16 °С — от 7 сут до 12 мес (в зависимости от используемого набора реагентов);
при температуре не выше –68 °С — длительно.

Допускается однократное замораживание–оттаивание материала.

Предварительная обработка

В ёмкость с мокротой добавить реагент для предобработки слизистого биологического материала (например, реагент для предобработки слизистого материала «МУКОЛИЗИН» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия) или аналогичный) в соотношении 1:5 (1 часть мокроты к 5 частям реагента), ориентируясь по градуировке ёмкости. В процессе разжижения мокроты (20–30 мин) ёмкость необходимо периодически встряхивать при помощи шейкера (например, настольный шейкер-инкубатор «New Brunswick™ Innova® 2000» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия) или аналогичный). Затем 1,0 мл разжиженной мокроты перенести, используя наконечник с фильтром, в пробирку объёмом 1,5 мл и центрифугировать 10 мин при 5 000–7 000 g (например, 8 000–10 000 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия) или аналогичной).

Удалить супернатант, используя наконечник без фильтра и отсасыватель медицинский, оставив 100–200 мкл надосадочной жидкости и осадок. Полученную пробу после тщательного перемешивания на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель «MSC-3000» (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичном) и осаждения капель со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием в течение 3–5 с использовать для экстракции НК.

Допускается экстракция НК из 100 мкл разжиженной мокроты без стадии центрифугирования.

При диагностике туберкулёза: при предварительной обработке мокроты использовать 10% водный раствор трехзамещенного фосфорнокислого натрия (Na₃PO₄) в соотношении 1:1 (1 часть мокроты к 1 части реагента) согласно методике, описанной в Приложении 11 Приказа МЗ РФ от 21.03.2003 № 109. Допустимо использование реагента для пробоподготовки и деконтаминации мокроты («BBL Mycoprep Kit») NALC/NaOH BD BBL™ MGIT™ («Becton Dickinson and Company», США) (РУ № ФСЗ 2009/04403), руководствуясь инструкцией по применению.

Выявляемые патогены

Биологический материал используется для выявления нуклеиновых кислот следующих микроорганизмов

Мокрота

Вирусы
Human adenovirus spp.	●
Human bocavirus	●
Human coronaviruses	●
Human enterovirus spp.	●
Human metapneumovirus	●
Human parechovirus	●
Human orthopneumovirus	●
Human parainfluenza viruses	●
Human rhinoviruses	●
Influenza A virus	●
Influenza A virus (H5N1)	●
Influenza B virus	●
MERS-CoV	●
SARS-CoV	●
SARS-CoV-2	●

Бактерии
Bacillus anthracis	●
Chlamydophila pneumoniae	●
Coxiella burnetii	●
Escherichia coli	●
Haemophilus influenzae	●
Legionella pneumophila	●
Mycobacterium tuberculosis complex	●
Mycoplasma pneumoniae	●
Proteus spp.	●
Pseudomonas aeroginosa	●
Staphylococcus aureus	●
Streptococcus pneumoniae	●
Yersinia pestis	●

Грибы
Candida albicans	●
Candida glabrata	●
Candida krusei	●
Candida parapsilosis	●
Candida tropicalis	●
Cryptococcus neoformans	●
Pneumocystis jirovecii	●

Животные
Ascaris spp.	●