Вернуться к списку биоматериалов Перейти к списку биоматериалов
Напечатать разделы:

Фекалии, меконий

Расходные материалы и реагенты
Изображение инструмента
Пипетка для переноса жидкости, стерильная, градуированная, 2,0 мл
Например, ООО «Комбитек Пластик», Россия или аналогичная
Изображение инструмента
Зонд-тампон стерильный в индивидуальной упаковке (полистирол + вискоза)
Например, «DELTALAB S.L.U.», Испания или аналогичный
Изображение инструмента
Контейнер пластиковый для взятия, хранения и транспортировки биологических образцов для анализа объёмом 60 мл (стерильный, в индивидуальной упаковке)
Например, ООО «Комбитек Пластик», Россия или аналогичный
Изображение инструмента
Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объёмом 1,5; 2,0 мл
Например, микроцентрифужные пробирки «Axygen, Inc.», США или аналогичные с транспортной средой:
  • Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) (натрия хлорид, 137 мМ; калия хлорид, 2,7 мМ; натрия монофосфат, 10 мМ; калия дифосфат, 2 мМ; pH 7,5 ± 0,2)
Взятие

Взятие фекалий (фекального мазка) произвести из подгузника или предварительно продезинфицированного и промытого от следов дезинфектанта горшка или подкладного судна, на дно которого помещён одноразовый полиэтиленовый пакет. При дефекации нежелательно попадание в судно мочи. Взятие мекония произвести из подгузника. Использовать пробы фекалий/мекония массой (объёмом) ~1,0–3,0 г (~1,0–3,0 мл), которые необходимо забирать из нескольких мест пипеткой, лопаточкой либо рабочей частью зонда-тампона.

При взятии фекального мазка перенести зонд-тампон в пробирку с 0,5 мл транспортной среды. Рабочую часть зонда-тампона, содержащую исследуемый материал, обломить и оставить в пробирке с транспортной средой. Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки. В случае невозможности обламывания погрузить рабочую часть зонда-тампона в транспортную среду и, прижав её к внутренней стенке пробирки, вращать 5–10 с, после чего зонд удалить, пробирку плотно закрыть. Недопустимо использование ножниц для обрезания рабочей части зонда-тампона!

При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, гной и др.), за исключением крови, их включают в отбираемую пробу.

Хранение

Условия хранения и транспортировки материала и предварительно обработанных проб
(если иные требования не предусмотрены инструкцией к набору реагентов)

1) Образцы нативных фекалий, фекальных мазков, мекония:

  • при температуре 18–25 °С — в течение 6 ч;
  • при температуре 2–8 °С — в течение 3 сут;
  • при температуре –16°С — в течение 7 сут;

2) суспензия фекалий, мекония с глицерином; осветленного фекального фильтрата:

  • при температуре от –24 до –16 °С — в течение 7 сут;
  • при температуре не выше –68 °С — длительно.

Допускается транспортировка предварительно обработанных образцов суспензии фекалий при температуре 2–8 °С в течение 24 ч.

Допускается однократное замораживание–оттаивание материала.

Предварительная обработка

Аналогично предварительной обработке фекалий (см. ниже). Для экстракции НК использовать аликвоту осветлённого фильтрата в объёме 100 мкл, если иной объём не предусмотрен инструкцией по применению к набору реагентов.

Условия хранения предварительно подготовленных образцов суспензии мекония

  • При температуре от –24 до –16 °С — в течение 7 сут;
  • при температуре не выше –68 °С — длительно.

Допускается однократное замораживание–оттаивание материала.

Приготовление фекальной суспензии

В пробирки объёмом 1,5 мл с 1,0 мл фосфатно-солевого буферного раствора (при необходимости хранения фекальной суспензии более 24 ч при температуре ниже 0 °С использовать 15–20% раствор глицерина в фосфатно-солевом буферном растворе) внести 0,1 г (0,1 мл) фекалий и тщательно перемешать на вортексе до образования гомогенной суспензии. Оптимальная концентрация суспензии ~10% (по объёму осадка после центрифугирования). Сбросить капли с крышек пробирок кратковременным центрифугированием на вортексе (не более 10 с).

Фекалии водянистой полупрозрачной консистенции использовать для экспресс-фильтрации без предварительного получения суспензии.

Проведение экспресс-фильтрации фекальной суспензии

Для экспресс-фильтрации использовать 2 наконечника на 1 мл (один с аэрозольным фильтром, другой — без него) и рабочую часть зонда-тампона (например, зонд-тампон стерильный в индивидуальной упаковке (полистирол с тампоном из вискозы) (например, «DELTALAB S.L.U.», Испания или аналогичный). В наконечник без аэрозольного фильтра вставить рабочую часть зонда-тампона, длина рукоятки которого не должна превышать 1,5 см, и зафиксировать проталкиванием в суженную часть наконечника. Наконечником с аэрозольным фильтром отобрать 1 мл фекальной суспензии, вставить его в подготовленный наконечник с фильтром до крепкого сцепления наконечников во избежание разбрызгивания и под давлением провести фильтрацию в чистую пробирку. При затруднённой фильтрации рекомендуется уменьшить концентрацию фекальной суспензии.

Для экстракции НК использовать 100 мкл осветлённого фильтрата, если иной объём не предусмотрен инструкцией по применению к набору реагентов.

Условия хранения предварительно подготовленных образцов суспензии фекалий

  • При температуре от –24 до –16 °С — в течение 7 сут;
  • при температуре не выше –68 °С — длительно.

Допускается однократное замораживание–оттаивание материала.

Допускается транспортировка предварительно обработанных образцов суспензии фекалий при температуре 2–8 °С в течение 24 ч.

Пробирку с биологическим материалом перемешать на вортексе и центрифугировать 5 мин при 600 g (например, 3 000 об/мин для лабораторной центрифуги «MiniSpin» («Eppendorf», Германия) или аналогичной).

Для экстракции НК использовать 50 мкл супернатанта, если иной объём не предусмотрен инструкцией по применению к набору реагентов.

Выявляемые патогены
Биологический материал используется для выявления нуклеиновых кислот следующих микроорганизмов
Фекалии Меконий
Вирусы
Hepatitis A virus ●
Hepatitis E virus ●
Human adenovirus spp. ●
Human astrovirus ●
Human enterovirus spp. ●
Human parechovirus ●
Norovirus GI ●
Norovirus GII ●
Human rotavirus A ●
Influenza A virus (H5N1) ●
MERS-CoV ●
Poliovirus (Sabin 1, 2, 3) ●
SARS-CoV ●
SARS-CoV-2 ●
Бактерии
Campylobacter spp. ●
Enteroaggregative Escherichia coli ●
Enterohemorrhagic Escherichia coli ●
Enteroinvasive Escherichia coli ●
Enteropathogenic Escherichia coli ●
Enterotoxigenic Escherichia coli ●
Helicobacter pylori ●
Listeria monocytogenes ●●
Mycobacterium tuberculosis complex ●
Salmonella spp. ●
Salmonella typhi ●
Shigella dysenteriae type 1 ●
Shigella spp. ●
Streptococcus agalactiae ●
Vibrio cholerae ●
Yersinia enterocolitica ●
Yersinia pestis ●
Yersinia pseudotuberculosis ●
Простейшие
Giardia lamblia ●
Животные
Ancylostoma duodenale ●
Ascaris spp. ●
Necator americanus ●
Schistosoma spp. ●
Trichuris trichiura ●