Моча

Способы предварительной обработки мочи

Первый способ. Образец мочи перемешать в исходной ёмкости. 1,0 мл материала перенести в пробирку объёмом 1,5 мл, используя наконечник с фильтром. Центрифугировать 5 мин при 10 000 g (например, 12 000 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия)). Удалить супернатант, используя наконечник без фильтра и отсасыватель медицинский, оставив 100 мкл надосадочной жидкости и осадок. При наличии большого количества солей ресуспендировать только верхний слой осадка в исходном объёме (1,0 мл) пробы и затем снова сконцентрировать аналогично способу, описанному выше. К осадку добавить равный объём транспортной среды «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)», тщательно перемешать содержимое на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель «MSC-3000» (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичном) и осадить капли со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием в течение 3–5 с. Полученный образец использовать для экстракции НК.

При необходимости возможно увеличение объёма исходного исследуемого образца мочи (например, при исследовании на наличие ДНК микобактерий туберкулёза). В этом случае 5,0–10,0 мл материала перенести в пробирку объёмом 10,0 мл, используя наконечник с фильтром или пастеровскую пипетку. Центрифугировать 20 мин при 3000 g (например, 600 об/мин для центрифуги медицинской лабораторной «LMC-3000» (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичной). Далее аналогично описанному выше.

Второй способ (последовательное концентрирование). Сначала 10,0–20,0 мл мочи центрифугировать 10 мин при 9000 g, используя центрифуги или для проб объёмом 10,0–20,0 мл, или для проб объёмом до 2,0 мл (при этом центрифугируя 10,0 мл мочи в нескольких пробирках объёмом 1,5–2,0 мл при 8000 g (например, 11 000 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия, или аналогичной), затем при центрифугировании 10,0–20,0 мл мочи удалить 9,0–19,0 мл супернатанта, осадок ресуспендировать в оставшемся 1,0 мл мочи и снова сконцентрировать методом центрифугирования в течение 10 мин при 11 000 g (например, 13 000 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия) или аналогичной). В случае если 10,0 мл мочи на первом этапе концентрировали сначала в пробирках объёмом 1,5–2 мл, необходимо из каждой пробирки, используя наконечник без фильтра и отсасыватель медицинский, удалить супернатант, оставив осадок 100 мкл надосадочной жидкости, ресуспендировать осадок в надосадочной жидкости и все полученные аликвоты перенести в одну пробирку объёмом 1,5–2,0 мл, после чего снова сконцентрировать методом центрифугирования в течение 10 мин при 11 000 g (например, 13 000 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия) или аналогичной). Удалить супернатант, используя наконечник без фильтра и отсасыватель медицинский, оставив 100 мкл надосадочной жидкости и осадок. Полученную пробу после тщательного перемешивания и осаждения капель со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием в течение 3–5 с на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель «MSC-3000» (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичном) использовать для экстракции НК.

При выявлении РНК арбовирусов в пробирки объёмом 1,5 мл перенести 1,2 мл материала, используя наконечник с фильтром. Центрифугировать 1 мин при 10 000 g (например, 12 000 об/мин для лабораторной микроцентрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия) или аналогичной). Осветлённую суспензию использовать для экстракции РНК. Если материал будет исследован позднее чем через 24 ч после предварительной обработки, необходимо перенести, используя наконечник с фильтром, по 1,2 мл мочи в несколько пробирок объёмом 1,5 мл, затем в них внести глицерин в объёме 10% от объёма пробы (120 мкл), перемешать на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель «MSC-3000» (SIA «Biosan», Латвия)) для равномерного распределения глицерина. Затем пробирки поместить на хранение.

Условия хранения образцов материала с глицерином

• При температуре от –24 до –16 °С — в течение 7 сут;
• при температуре не выше –68 °С — длительно.

Допускается однократное замораживание–оттаивание материала.