Вернуться к списку биоматериалов Перейти к списку биоматериалов
Напечатать разделы:

Членистоногие — переносчики возбудителей болезней человека: клещи, комары, вши, блохи

Расходные материалы и реагенты
Изображение инструмента
Медицинские одноразовые стерильные пинцеты
Например, «Полимерные изделия», Россия или аналогичные
Изображение инструмента
Медицинские одноразовые стерильные ножницы
Например, «Полимерные изделия», Россия или аналогичные
Изображение инструмента
Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объёмом 1,5; 2,0 мл
Например, микроцентрифужные пробирки «Axygen, Inc.», США или аналогичные
Взятие

Комаров, клещей, блох и вшей, доставленных в лабораторию, обездвижить (с помощью табачного дыма или замораживанием) для определения морфологических признаков. После определения вида и пола, уточнения места и даты сбора материал может быть объединён в пулы. Пулирование доставленных членистоногих осуществляют в соответствии с МУ 3.1.3012-12 «Сбор, учёт и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих в природных очагах опасных инфекционных болезней». В пробу включают определённое число особей с одного места обитания, однотипных объектов.

При исследовании на наличие ДНК возбудителя чумы в одну пробу включают до 30 блох или мелких клещей, вшей. Индивидуальное исследование (в частности, блох в очагах чумы) проводят в случае их сбора с трупа животного или грызуна, имеющего характерные для чумы патологические изменения, а также для установления процента заражённости эктопаразитов в период эпизоотии.

Иксодовых клещей исследуют отдельно по фазам развития. В зависимости от исследуемого в членистоногих патогена и стадии развития клеща пулы могут объединять следующее количество особей: 1–3 напитавшихся имаго; 10–50 голодных имаго; 10–15 напитавшихся нимф; 50–100 голодных нимф; 100–200 личинок.

Блох, гамазовых клещей, вшей исследуют до 100 особей в пробе. Кровососущих двукрылых объединяют в пулы: до 50–100 комаров, до 250 мошек и 20–25 слепней (у них предварительно отстригают конечности и крылья).

Хранение

Условия хранения и транспортировки материала и предварительно обработанных проб

1) После разбора и формирования проб:

  • при температуре от –24 до –16 °С — в течение 1 мес;
  • при температуре не выше –68 °С — длительно;

2) предварительно обработанный материал (после гомогенизации и осветления):

  • при температуре от –24 до –16 °С — в течение 7 сут;
  • при температуре не выше –68 °С — длительно.

Допускается однократное замораживание–оттаивание материала

Предварительная обработка

Сформированный пул или индивидуальные особи клещей поместить в пробирки объёмом 1,5 мл, добавить 1,0 мл 96% раствора этилового спирта, перемешать на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель «MSC-3000» (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичном), затем для осаждения капель со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугировать пробирки 3–5 с.

С помощью отсасывателя медицинского, используя отдельный наконечник без фильтра, удалить надосадочную жидкость. Затем добавить в каждую пробирку 1,0 мл 0,15 М раствора хлорида натрия, перемешать на вортексе (например, центрифуге/вортексе Мульти-Спин модель «MSC-3000» (SIA «Biosan», Латвия) или аналогичном) и вновь центрифугировать пробирки 3–5 с для осаждения капель, с помощью отсасывателя медицинского удалить надосадочную жидкость.

Перенести обработанных клещей в стерильную фарфоровую ступку, добавить необходимый объём раствора для гомогенизации: 300 мкл — 1 клещ р. Ixodes, 600 мкл — 1 клещ р. Dermacentor, 1,0 мл — пул клещей или полностью напитавшийся клещ, 10 мкл в расчёте на 1 гамазового клеща) 0,15 М раствора хлорида натрия и гомогенизировать пробу.

При использовании лабораторного гомогенизатора (например, «TissueLyser LT» («QIAGEN GmbH», Германия) или аналогичный) применять следующие параметры для гомогенизации клещей: диаметр шариков — 5 мм (клещ р. Dermacentor), 3 мм (клещ р. Ixodes), частота — 50 Гц/с, продолжительность гомогенизации — 10 мин. После гомогенизации перенести пробу в пробирку объёмом 1,5 мл, используя наконечник с фильтром, и центрифугировать при 1 200 g (например, 5 000 об/мин для лабораторной центрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation, Германия) или аналогичной) в течение 2 мин для осветления пробы.

Для экстракции НК использовать 100 мкл надосадочной жидкости.

Сформированный пул или индивидуальные особи комаров поместить в стерильную фарфоровую ступку, добавить 0,15 М раствора хлорида натрия в расчете 30 мкл на одного комара, если гомогенизируют пул, и 100 мкл, если гомогенизируют индивидуальные особи. При использовании лабораторного гомогенизатора (например, «TissueLyser LT» («QIAGEN GmbH», Германия) или аналогичный) применять следующие параметры для гомогенизации: диаметр шариков — 3 мм, частота — 50 Гц/с, продолжительность гомогенизации — 10 мин. После гомогенизации перенести пробу в пробирку объёмом 1,5 мл, используя наконечник с фильтром, и центрифугировать при 10 000 g (например, 12 000 об/мин для лабораторной центрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия) или аналогичной) в течение 1 мин. Для экстракции НК использовать 100 мкл надосадочной жидкости.

Сформированный пул или индивидуальные особи членистоногих поместить в стерильную фарфоровую ступку, добавить 0,15 М раствора хлорида натрия в расчете 30 мкл на особь в пуле или 100 мкл для индивидуальной особи. При использовании лабораторного гомогенизатора (например, «TissueLyser LT» («QIAGEN GmbH», Германия) или аналогичный) применять следующие параметры для гомогенизации: диаметр шариков — 3 мм, частота — 50 Гц/с, продолжительность гомогенизации — 10 мин. После гомогенизации перенести пробу в пробирку объёмом 1,5 мл, используя наконечник с фильтром, и центрифугировать при 1 200 g (например, 5 000 об/мин для лабораторной центрифуги «MiniSpin» («Eppendorf Manufacturing Corporation», Германия) или аналогичной) в течение 2 мин для осветления пробы. Для экстракции НК использовать 100 мкл надосадочной жидкости.

Выявляемые патогены
Биологический материал используется для выявления нуклеиновых кислот следующих микроорганизмов
Клещи Комары Блохи, вши
Вирусы
Crimean-Congo hemorrhagic fever virus ●
Dengue virus ●
Tick-borne encephalitis virus ●
West Nile virus ●
Zika virus ●
Бактерии
Anaplasma phagocytophilum ●
Bartonella spp. ●
Borrelia burgdorferi sensu lato ●
Borrelia miyamotoi ●
Borrelia spp. ●
Ehrlichia chaffeensis ●
Ehrlichia muris ●
Rickettsia conorii ●
Rickettsia spp. ●
Yersinia pestis ●●
Простейшие
Plasmodium spp. ●
Plasmodium vivax ●